Skip to content

ciężkowice google maps

2 miesiące ago

47 words

Aby określić swoistość wiązania, przetestowaliśmy wpływ apo-Tf (konformacja otwarta na żelazo, otwarta) i holo-Tf (zamknięta konformacja zawierająca żelazo) na wiązanie faga z powierzchnią komórki. Nieoczekiwanie zaobserwowaliśmy wzmocnione wiązanie po dodaniu apo-Tf do układu (test ucznia, P <0,05). Następnie przeanalizowaliśmy wiązanie faga CRTIGPSVC z TfR i do apo-Tf i holo-Tf w systemie bezkomórkowym. Beztwarzowy fag i BSA zastosowano jako kontrole negatywne. Konsekwentnie, obserwowaliśmy wiązanie faga CRTIGPSVC do apo-Tf, ale nie do TfR lub holo-Tf (Figura 1G). Biorąc pod uwagę, że faga CRTIGPSVC wiąże się selektywnie z apo-Tf, postawiliśmy hipotezę, że peptyd CRTIGPSVC może funkcjonalnie naśladować żelazo. Jeśli tak, można spekulować, że wiązanie CRTIGPSVC, podobnie jak wiązanie żelaza, indukowałoby allosteryczne zmiany konformacyjne w apo-Tf, prowadząc do endocytozy i ostatecznie do uwalniania ukierunkowanego na peptyd faga do cytoplazmy komórek TfR-dodatnich. Aby przetestować tę hipotezę, zaprojektowaliśmy serię testów wiązania fagów in vitro do apo-Tf i holo-Tf w obecności żelaza żelazowego (Fe + 3) i EDTA (Figura 1, H i I). Żelazo znosiło wiązanie faga CRTIGPSVC do apo-Tf (Figura 1H), podczas gdy nie obserwowano większych zmian w wiązaniu ukierunkowanego faga z holo-Tf (Figura 1I). Konsekwentnie, wpływ żelaza na wiązanie cząstek faga ukierunkowanych na peptyd do apo-Tf lub holo-Tf został odwrócony przez dodanie EDTA (Figura 1, H i I), co wskazuje, że CRTIGPSVC i żelazo mają podobne allosteryczne działanie na apo-Tf. Takie same wyniki uzyskano dla syntetycznego peptydu CRTIGPSVC, którego wzrost stężenia unieważnił wiązanie ukierunkowanego faga z apo-Tf (dane nie pokazane). Wyniki te sugerują, że fag CRTIGPSVC funkcjonalnie naśladuje żelazo i wiąże się z apo-Tf. Ponadto, dane te są zgodne z hipotezą, że selektywna internalizacja kompleksu Tf / TfR / CRTIGPSVC do komórek TfR-pozytywnych jest mediowana przez zmiany konformacyjne indukowane przez wiązanie CRTIGPSVC z apo-Tf. Aby ocenić tę roboczą hipotezę, zastosowaliśmy metodologie optyczne, początkowo stosując analizę fluorescencji w stanie ustalonym (odnośniki 32. 34 i Figura 2, A. C). Najpierw przypisaliśmy zmiany w widmach fluorescencji do apo-Tf przy braku lub obecności Fe3 + (Figura 2A). Następnie wykorzystaliśmy rosnące stężenia peptydu CRTIGPSVC do oceny zmian w konformacji apo-Tf, na co wskazują zmiany w widmach fluorescencji. Obserwowaliśmy stopniowe przesunięcie widm fluorescencji apo-Tf w obecności wzrastających ilości CRTIGPSVC (Figura 2B); w tych warunkach eksperymentalnych oddziaływanie osiągnęło nasycenie w stosunku molowym 1: 6 (apo-Tf / CRTIGPSVC). Na koniec, panel niepowiązanych peptydów kontrolnych służył do wykazania, że zjawisko jest specyficzne dla interakcji między apo-Tf i CRTIGPSVC (Figura 2C). Konsekwentne wyniki doświadczalne uzyskano również za pomocą innej metody optycznej, analizy dichroizmu kołowego (CD) (Figura 2, D. F). Zgodnie z oczekiwaniami dodanie Fe + 3 do apo-Tf spowodowało przesunięcie widm, odzwierciedlając znaną indukowaną przez żelazo zmianę konformacji z apo-Tf do holo-Tf (odniesienia 35. 37 i Figura 2D). Peptyd CRTIGPSVC pośredniczył również w zmianach konformacyjnych w apo-Tf (Figura 2E), przy czym nie wykryto takich zmian przy dodaniu niepowiązanych peptydów kontrolnych (Figura 2F). Łącznie dane te silnie sugerują, że peptyd CRTIGPSVC pośredniczy w zmianie konformacji białka w apo-Tf. Należy zauważyć, że w przeciwieństwie do żelaza, peptyd nie wydaje się pośredniczyć w pełnej zmianie konformacyjnej z apo-Tf do holo-Tf. W związku z tym konieczne będą dalsze badania, aby zrozumieć dokładną naturę interakcji peptyd-białko. Figura 2CRTIGPSVC peptyd wiąże się z ludzkim apo-Tf i indukuje allosteryczne zmiany konformacyjne
[patrz też: przetoka zębowa, przetoka dziąsłowa, dimetylortęć ]

0 thoughts on “ciężkowice google maps”