Skip to content

lekarz psychiatra toruń prywatnie

2 miesiące ago

552 words

Ta sama mikrodelecja pojawiła się również w niektórych pozornie sporadycznych przypadkach PHP-Ib, ale nie w zdrowych niespokrewnionych kontrolach. Metody Pacjenci z PHP-Ib. Większość zbadanych przypadków AD-PHP-Ib zostało wcześniej zgłoszonych (22, 23, 25). Biochemiczne cechy probantów w rodzinach, które wcześniej nie były przedmiotem badań AD-PHP-Ib, są przedstawione w Tabeli 1. Badanie zostało zatwierdzone przez Podkomisję ds. Studiów Humanistycznych w Szpitalu Ogólnym w Massachusetts i uzyskano świadomą zgodę od wszystkich osób. Tabela Informacje na temat przypadków indeksowych w uprzednio niepoddanych badaniu grupach AD-PHP-Ib Analiza genotypowa. Większość markerów na chromosomie 20q13.3, które były analizowane w tym badaniu, oraz warunki ich amplifikacji przez PCR zostały wcześniej opisane (22, 23, 26). Marker mikrosatelitarny 261P9-CA1 amplifikowano za pomocą następujących primerów: 5a-ACATGTGTGTGCACCTGTCC-3. (forward) i 5. -GGCTTTTCTCAAAGCACCAC-3. (rewers). Polimorfizm pojedynczego nukleotydu C / T (SNP) 261P9-15,686 zamplifikowano za pomocą następujących primerów: 5a-ATGTTTCCCCTTGATTGTGC-3. (forward) i 5. -GCCTGCCTACCTAAATCTT-3. (rewers). MslI, którego sekwencja rozpoznawcza jest wprowadzona przez nukleotyd tymidynowy, została użyta do określenia macierzystego pochodzenia każdego allelu. Allel C daje fragmenty 664-bp i 426-bp, a allel T ma 473-bp, 191-bp i 426-bp fragmentów. Warunki PCR były takie, jak opisano poprzednio (23). Wykrywanie mikrodelecji 3 kb metodą analizy Southern blot. (W przybliżeniu 3-kb mikrodelecia będą dalej określane jako mikrodelecia 3 kb.) Genomowy DNA strawiono Avrll lub ClaI, a następnie rozdzielono na 0,8% żelu agarozowym przed przeniesieniem na nitrocelulozę. Bloty hybrydyzowano z sondami znakowanymi 32P wytworzonymi przez PCR, odpowiadającymi nukleotydom odpowiednio 2 163. 3 906 i 15 213. 16 303 AL139349. Warunki hybrydyzacji i płukania były takie, jak opisano poprzednio (22). Wykrywanie mikrodelecji 3 kb metodą PCR. Usunięty region amplifikowano za pomocą następujących starterów do przodu i do tyłu: 5a-TTGGCAGATAACTGCTGTGG-3. i 5-CGAGGCATGGGAAGAGAATA-3 .. Rozbudowany system długich matryc PCR był stosowany z Buffer 3 (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, Indiana, USA). Warunki cykliczne obejmowały jeden cykl 94 ° C przez 2 minuty; dziesięć cykli w 94 ° C przez 10 sekund, 58 ° C przez 30 sekund i 68 ° C przez 4 minuty; 25 cykli w 94 ° C przez 10 sekund, 58 ° C przez 30 sekund i 68 ° C przez 4 minuty, z dodatkowymi 20 sekundami w 68 ° C po każdym cyklu; i końcowy etap wydłużania w 68 ° C przez 7 minut. W oparciu o lokalizację starterów produkt odpowiadał nukleotydom 3 606. 7 951 AL139349, dając w ten sposób fragment około 4,3 kb z allelu typu dzikiego i około 1,3 kb ze zmutowanego allelu. Fragmenty te wykryto za pomocą 0,7% elektroforezy w żelu agarozowym, a następnie barwienia bromkiem etydyny. Analiza sekwencji regionu usunięta w AD-PHP-Ib i kodowanie eksonów STX16. Zastosowano trzy nachodzące na siebie PCR w celu powielenia regionu 3 kb z genomowego DNA pacjentów, którzy nie mają mikrodelecji. PCR zastosowano również do amplifikacji indywidualnych eksonów STX16 z genomowego DNA osobnika dotkniętego chorobą z pokrewnego W (W-III / 12). Produkty PCR były sekwencyjnie sekwencjonowane za pomocą zagnieżdżonych starterów do sekwencjonowania, jak opisano wcześniej (23). Uzyskane sekwencje porównano z sekwencją AL139349, z wyjątkiem sekwencji z egzonu STX16, którą porównano z sekwencją AL050327. Sekwencje primerów są dostępne na życzenie. Analiza metylacji GNAS. W celu oceny metylacji różnicowej, Southern blot z genomowego DNA trawionego enzymami wrażliwymi na metylację przeprowadzono zgodnie z opisem (23). Alternatywnie, lub w połączeniu, różnicową metylację oceniano za pomocą bezpośredniej sekwencji i enzymatycznych analiz restrykcyjnych produktów PCR amplifikowanych z potraktowanego wodorosiarczynem genomowego DNA (analiza PCR wodorosiarczynem)
[przypisy: przetoka zęba, rzepka kolanowa, rzepka w kolanie ]

0 thoughts on “lekarz psychiatra toruń prywatnie”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: biegunka u noworodka[…]