Skip to content

terapia manualna cena

1 miesiąc ago

497 words

Brak tego zaburzenia snu u dzieci z mutacjami TRAC jest zgodny z sugestią, że związek pomiędzy narkolepsją a TRA @ może być związany z procesem autoimmunologicznym obejmującym zniszczenie neuronów wytwarzających hipokretynę (24). Metody Stwierdzenie i pobieranie próbek przez pacjenta. Badanie to przeprowadzono zgodnie z zasadami wyrażonymi w Deklaracji Helsińskiej. Badanie zostało zatwierdzone przez South Birmingham Research Ethics Committee, Wielka Brytania. Wszyscy uczestnicy wyrazili świadomą zgodę na pobranie próbek i późniejszą analizę. DNA ekstrahowano z pełnej krwi i ekstrahowano (Gentra, Puregene DNA purification system) dla wszystkich członków rodziny. Mapowanie genów. Skanowanie łączne obejmujące cały genom przeprowadzono przy użyciu układu Affymetrix 250K SNP u chorego osobnika z każdej rodziny z zaburzeniem niedoboru odporności (F1; II: 3 i F2; II: 2). W wyniku tego skanu zidentyfikowano pojedynczy region homozygotyczny na chromosomie 14q11.2, dzielony przez dwie dotknięte chorobą osoby (Figura 2A). Te homozygotyczne regiony dalej analizowano przez wpisanie mikrosatelitarnych markerów (D14S742, D14S283, D14S1280 i D14S275) u wszystkich członków rodziny, od których DNA było dostępne (Figura 2B). Analiza mutacji. Zidentyfikowaliśmy potencjalne geny kandydujące wykorzystując dane z baz danych ludzkich genomów National Center for Biotechnology Information (NCBI) i University of California Santa Cruz. Sekwencjonowanie przeprowadzono standardowymi metodami w automatycznym sekwenatorze ABI 3730. W przypadku TRAC zaprojektowaliśmy pary primerów przy użyciu startera egzonowego (http://ihg.helmholtzmuenchen.de/ihg/EasyExonPrimer.html) w celu wzmocnienia kodujących egzonów 1. 3. Pełny region kodujący ludzkiego TRAC zamplifikowano PCR z genomowego DNA z następującymi starterami: ekson TRAC (TRAC_Exon1_FOR) 5a-CAAAGAGGGAAATGAGATCATG-3. i (TRAC_Exon1_REV) 5a-GGCCATTCCTGAAGCAAG-3; TRAC exon 2 (TRAC_Exon2_FOR) 5. -TGCCCAAGAACTAGGAGGTC-3. i (TRAC_Exon2_REV) 5 (3-GGTTATTGCGGGTTCATCAC-3; TRAC exon 3 (TRAC_Exon3_FOR) 5. -GCTCTGCCTTGGGGAAAAC-3. i (TRAC_Exon3_REV) 5a-CTGCAGGGAGGTTTGCTCTC-3 .. Genomowy DNA z 192 dopasowanych pod względem etnicznym grup kontrolnych zastosowano do przesiewu pod kątem zidentyfikowanej mutacji TRAC. RT-PCR. Całkowity RNA ekstrahowano z ludzkich limfocytów przy użyciu zestawu RNeasy Mini Kit (QIAGEN). cDNA zsyntetyzowano stosując losowe startery i odwrotną transkryptazę AMV stosując system odwrotnej transkrypcji Promega zgodnie z instrukcjami producenta (A3500, Promega). RT-PCR TRAC przeprowadzono przy użyciu następujących starterów: TRAC2F (5a-GTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTC-3a) i TRACx4R2 (5a-GGTAGCAGCTTTCACCTCCTTG-3 .). Konstrukty plazmidowe. Konstrukty typu dzikiego z pełnym regionem kodującym ludzkiego TRAC i TRBC1 zamplifikowano PCR z cDNA z następującymi starterami: TRAC (TRAC_HA_FOR) 5 (3-GCTAGTCGACTATATCCAGAACCCTGACCC-3. i (TRAC_WT_REV) 5. -CGATGGTACCTCAGCTGGACCACAGCCGCA-3 .; TRBC1 (TRBC1_GFP_FOR) 5. -GCTAGTCGACTTAGGACCTGAACAAGGTGTT-3. i (TRBC1_WT_REV) 5. -CGATGGTACCACAGAAATCCTTTCTCTTGAC-3 .. Zmutowany konstrukt TRAC amplifikowano PCR z cDNA ze starterami (TRAC_HA_FOR) 5a-GCTAGTCGACTATATCCAGAACCCTGACCC-3. i (TRAC_MUT_REV) 5. -CGATGGTACCCTGTTTCAAAGCTTTTCTC-3 .. Startery skierowane do przodu zawierały miejsce restrykcyjne Sali, a startery odwrotne zawierały miejsce KpnI, aby umożliwić subklonowanie fragmentów PCR do wektorów pEGFP-C2 i pCMV-HA (BD Biosciences. Clontech). Wszystkie konstrukty plazmidowe zweryfikowano przez sekwencjonowanie. Hodowlę komórkową. Komórki HeLa rutynowo utrzymywano w DMEM (Sigma-Aldrich) uzupełnionym 10% płodową surowicą bydlęcą w 37 ° C, 5% CO2. Lokalizacja komórkowa. PBMC uzyskano od pacjenta F1; II: 3 i kontrolowano krew i przechowywano zamrożone w <140 ° C w 10% DMSO, 90% płodowej surowicy cielęcej [przypisy: przetoka dziąsłowa, przetoka zębowa, przewlekła niewydolność żylna ]

0 thoughts on “terapia manualna cena”

  1. Ułożenie chorego na boku uchroni poszkodowanego przed zachłyśnięciem się własnymi wydzielinami.