Skip to content

wtórne ognisko nowotworu

2 tygodnie ago

670 words

Aby ocenić, czy polipeptydy TCR zostały zatrzymane w komórce, przygotowaliśmy lizaty PBMC pacjenta i przeprowadziliśmy badanie immunoblotowe za pomocą przeciwciał przeciwko TCR. i TCR. (Figura 4), normalizując proporcje TCR . Komórki T. W przeciwieństwie do normalnych komórek kontrolnych, komórki pacjenta wykazywały niewykrywalnie niską ekspresję TCR. lub TCR. polipeptydów, co sugeruje, że mutacja TRAC nie tylko skutkowała TCR. niedobór, ale także zredukowany TCR. wyrażenie. Ryc. 4Immunoblot TCR. i. CR. w komórkach pacjentów, prawidłowych komórkach kontrolnych i ujemnych komórkach kontrolnych (RPMI 8866). Pas pacjenta był przeciążony, aby zrekompensować mniejszą liczbę nie- Limfocyty T pacjenta (przez densytometrię, próbka od pacjenta miała około 3 razy więcej aktyny niż kontrola, a komórki T nie należące do pacjenta stanowiły około 20% całkowitej liczby limfocytów w czasie analizy (oczekiwana proporcja u dorosłych). kontrola wynosi 60% . 70%) W celu zbadania z większą wrażliwością jakiegokolwiek wpływu na ekspresję i subkomórkowej lokalizacji kompleksu TCR ., odczyniliśmy immunologicznie pacjentów i kontrolowaliśmy PBMC z przeciwciałami przeciwko receptorowi T i komórkom a i. obserwowano lokalizację przy użyciu mikroskopii immunofluorescencyjnej W komórkach kontrolnych łatwo było uwidocznić kolokalizację łańcuchów a i p w różnych obszarach błony komórkowej, a komórki pacjenta wykazywały zmniejszone poziomy ekspresji i brak dowodów kolokalizacji (figura 5), co sugeruje, że zmutowany łańcuch a nie jest w stanie kompleksowo normalnie łańcuch TCR, zgodny z tym i w przeciwieństwie do TCRa typu dzikiego, mutanta znakowanego HA TCR A i TCRy znakowanego GFP nie udało się kolokalizować wewnątrzkomórkowo w transfekowanym HeLa komórki (Figura 6). Ekspresja powierzchni w tym układzie nie mogła być oceniona ze względu na brak ekspresji CD3. Figura 5 Mutacja TRAC prowadzi do błędnej lokalizacji TCR. i -. więzy. Pacjent i kontrolne PBMC inkubowano z przeciwciałami przeciwko receptorowi komórek T. i . łańcuchy i oglądane przez mikroskopię konfokalną. Pasek skali: 6 m. Rysunek 6 Komórkowa lokalizacja TCR. kompleks w komórkach HeLa. Komórki HeLa hodowane na szkiełkach nakrywkowych kotransfekowano pCMV.HA-TRAC i pEGFP-TRBC1 (górny rząd), pCMV.HA-TRACexon1 . 2 i pEGFP-TRBC1 (drugi rząd), pEGFP-TRBC1 (trzeci rząd), pCMV.HA- TRAC (czwarty rząd) i pCMV.HA-TRACexon1. 2 (piąty rząd). Komórki znakowano przeciwciałem anty-HA, a następnie sprzężono drugorzędowe przeciwciało Alexa Fluor 546a, a jądra barwiono jodkiem TO-PRO-3. Komórki wizualizowano za pomocą mikroskopu konfokalnego. Pasek skali: 15 .m. Dyskusja Poza ujawnieniem tego, co uważamy za nowe zaburzenie immunologiczne, obie rodziny zawierają najbardziej niezwykłą mutację. Zgodnie z naszą wiedzą, nie ma wcześniejszych doniesień o mutacji w bazie po kodonie terminacji (c. * 1) w chorobie ludzkiej. Prokarionty i eukarioty wykazują wysoce znaczące odchylenia od oczekiwanego rozkładu nukleotydów przed i po kodonie stop (3), a czynnik dekodowania sygnału końcowego ssaka eRF1 bezwzględnie wymaga tetranukleotydu jako minimalnego elementu rozpoznawczego in vitro (8). Zatem, podstawienia nukleotydów w bazie po kodonie terminacji mogą powodować chorobę przez osłabienie wydajności sygnału stopu. Tetranukleotydu. (3). Jednakże, gdy modelowaliśmy ten efekt w hodowanych komórkach, odkryliśmy, że chociaż mutacja c.1 * G> A spowodowała niewielki wzrost w czytaniu, to było mało prawdopodobne, aby było wystarczające do wywołania fenotypu klinicznego i patogenności c. * 1G> Mutacja była wynikiem nieprawidłowego splicingu. W związku z tym pozornie wyjątkowa natura mutacji c. * w TRAC wydaje się wynikać z niezwykłej struktury genu egzonu / intronu. Nie wiadomo, czy mutacje c.1 * w innych genach mogą powodować ludzką chorobę, powodując. Nieszczelny sygnał zakończenia. sam, ale taki efekt może być oczywisty tylko wtedy, gdy komórki są wrażliwe na małe zmiany w ekspresji normalnego produktu genu lub w przypadku nieprawidłowego przerzutowego białka. ma dominujący wpływ na funkcję białka typu dzikiego. Większość komórek T wyraża heterodimeryczny receptor komórek T składający się z. i . peptydy w połączeniu z podjednostkami kompleksu CD3 (łańcuchy a, a, a, a i y)
[patrz też: rzepka kolanowa, rodzaje ran, sp 18 pszczyna ]